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原代细胞的培养

原代细胞的培养

原代细胞简介:原代细胞(primary culture cell)是指从机体取出后立即培养的细胞。有人把培养的第1代细胞与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养。原代细胞不仅广泛应用于分子、细胞生物学和生物医学基础研究,如蛋白质组学、基因组学...

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原代细胞简介:

原代细胞(primary culture cell)是指从机体取出后立即培养的细胞。有人把培养的第1代细胞与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养。原代细胞不仅广泛应用于分子、细胞生物学和生物医学基础研究,如蛋白质组学、基因组学、细胞株(系)研究、DNA,RNA和遗传学研究等,还可应用于当今热门的生物医药产业如药物筛选、药物代谢和毒理研究、癌症药物的研究等。


原代细胞培养:


1、原代培养材料的选择,尽量选取繁殖能力较强的组织,如胚胎、幼小的生物体或者肿瘤组织等。


2、注意无菌操作,紫外消毒30min后关闭紫外灯,开启超净台正常工作状态,用酒精消毒操作者的双手。


3、整个取材操作要迅速,尤其孕鼠浸泡乙醇时间1min左右,不能过长,以确保胚胎细胞活性。


4、运用消化法时胰酶温度应低于37℃,浓度只需平时消化细胞浓度的一半。因为此过程不像消化培养细胞时的1~10min,而是至少20min,先消化下来的细胞在此胰酶消化液中继续消化了10min以上。所以胰酶不能作用过强,否则这些细胞易被损伤而不易生存。


5、如使用组织块法,则应待组织块略干燥,能黏附于瓶壁时再使之与培养液接触,匆使组织块漂浮起来。如果组织块没有黏壁,则细胞不易生长,即使生长也因没有贴在瓶壁上,从而因不能观察到而无法收集到生长的细胞。


6、原代培养操作时,也可以使用未添加血清的DMEM或PBS洗涤子宫、胚胎或组织块等。




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