细胞划痕实验的优缺点

细胞迁移(cell migration)：也称为细胞移动、细胞爬行或细胞运动，是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。

用途：

肿瘤细胞运动常用研究方法。这种方法的原理是，当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。基本的步骤包括“划痕”的制造，细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。

它参与到很多生理和病理的活动中，如下：

免疫：如淋巴细胞的定向迁移是其分化成熟和发挥功能的关键之一；

炎症：炎症反应最重要的功能是将白细胞送到炎症灶，白细胞迁移到炎症部位并发挥其吞噬和组织损伤作用；

肿瘤转移：肿瘤转移是肿瘤恶化后最常见的活动，如侵入淋巴管、血管后随脉管系统实现远处转移；

损伤修复：当机体发生损伤时，免疫细胞和血小板会迁移到损伤部位，参与消炎和凝血；

胚胎发育：胚胎期不同类型祖细胞迁移至特异靶位以保证各组织、器官的正常发育。

细胞划痕实验

细胞划痕实验是目前测定细胞迁移运动与修复能力的最常用也是最简单的方法，基本原理是：在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕/伤口”，边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕/伤口”愈合。因其类似体外伤口愈合过程，又名伤口愈合实验（Wound-Healing Assay），广泛用于可以观察药物、基因等外源因素对细胞迁移和修复的影响。

细胞划痕实验方法与注意事项

细胞划痕实验（Wound Healing）是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外实验方法。

这种方法的原理是——当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上划痕工具制造一个空白区域，空白区域的细胞被机械力去除掉了，通过一段时间的培养，观察细胞向无细胞区域迁移的情况，通过测量细胞的迁移距反映细胞的迁移能力。

常用实验方法

实验材料:

1.细胞培养平板，一般使用6孔板，大小合适，便于划线和观察；

2.marker笔，用于观察标记；

3.直尺，用于观察时对细胞划痕宽度测量；

4.20 微升枪头（灭菌）或者经过灭菌处理的牙签均可，用于在单层细胞上划痕；

5.无血清培养基

6.PBS

注：所有能灭菌的器械都要灭菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min（超净台内）

实验步骤：

1.培养板划线

首先使用 marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀的划横线，大约每隔 0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。划线时注意线不要太粗 。

2.铺细胞

在孔中加入约 5×10^5个细胞（不同的细胞数量有所不同，根据细胞的生长快慢调整），接种原则为过夜后融合率达到 100%。

3.细胞划线

第二天用枪头或者无菌牙签，垂直与细胞平面，沿着头一天划在平板背面的线在细胞层上进行划痕(不同孔之间最好使用同一只枪头或牙签)。

4.洗细胞

划痕完成后，使用无菌 PBS 洗细胞 3 次，洗去不贴壁的细胞，即划线时划线的细胞，是划线后留下的间隙清晰可见，然后更换新鲜无血清培养基。

5.细胞培养、观察

将细胞放入 37℃ 5% CO2培养箱，培养。然后在适当的时间点，如 0，6，12，24h 取出细胞，显微镜线观察并测量划痕的宽度，并拍照(具体时间依实验需要而定)。

6.结果分析

使用 Image J 软件打开图片后，随机划取 6 至8 条水平线，计算细胞间距离的均值。

注: (1)实验时，选择适当的细胞贴壁率；(2)划线后，通常采用无血清或低血清（＜ 2%）的培养液。

注意事项

1. 铺细胞最好使用6孔板，因为6孔板可以保证有相当距离的平直划痕，而且因为有5 条定位线，与划痕相交，这样就有10个可固定监测点，不作重复，误差也很小。

2. 如果你连续监测 24 小时，你需要考虑到划痕缩小是细胞迁移和细胞繁殖共同作用的结果，而不是单纯的细胞迁移。如果你要单纯的考虑细胞迁移，你可以先用丝裂霉素（1 μg/ml）处理一小时，抑制细胞的分裂，这样你的结果就是细胞迁移的作用了。另外，使用无血清培养基也可以降低增殖对实验结果的影响。

3.照片拍完之后，可以用 image J 来测量划痕区域的像素定量比较细胞迁移的速度。

4.虽然无血清培养可以忽略细胞增殖的影响，但是由于细胞内信号传导系统整体性的下调节，细胞迁移的速度也会慢很多。

细胞划痕实验结果与分析

优点：

1.在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。

2.非常适合研究细胞与胞外基质（ECM），细胞与细胞之间相互作用引起的细胞 迁移。

3.与包括活细胞成像在内的显微镜系统兼容，可用于分析细胞间的相互作用。

4.研究细胞迁移的体外实验中最简单的方法。

Culture Insert方法

1.准备细胞，培养液，culture Insert。

2.如图，将细胞接种于Dish中间的Insert，细胞长满Insert区域后用镊子移除Insert即可产生500μm宽度的划痕。

3.每隔4-6小时拍照记录。

4.根据收集图片数据分析实验结果。

缺点：

1.手动划痕，不能保证每次划痕的一致；

2.有时候在划细胞的同时会刮坏一片细胞，对划痕的边缘的细胞造成机械损伤；

3.如果培养皿底部还有包被蛋白的话，枪头划过，很可能伤害到包被，进而影响到细胞迁移，结果便很难判断是哪个因素造成了决定性的影响

具体沟通：400-9688-170

增值服务

组织/切片服务

各类病理染色服务

免疫组织化学(IHC)实验服务

western blot（wb）实验服务

动物各类疾病模型服务

动物活体成像实验服务

动物微型CT成像实验服务

动物核磁共振(MRI)成像实验服务

动物超声成像实验服务

分子及蛋白实验检测服务

透射电镜(TEM)实验服务

细胞培养实验服务

细胞造模实验服务

细胞毒性检测服务

慢病毒、腺病毒、载体构建

南京中科世康生物拥有专业的动物造模平台，实验人员拥有十年的实战经验，跟多个高校、医院老师合作，服务内容包含：透射电镜、动物造模、细胞实验，he染色、免疫组化，蛋白组学、代谢组学、Western  Blot  、PCR实验、膜片钳检测等等，期待您的咨询~  联系电话：400-9688-170