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细胞功能学实验盘点

细胞功能学实验盘点

细胞增值细胞增殖与细胞凋亡、细胞周期等是肿瘤研究的重要表型,是分子生物学和药理学研究解决的问题之一。通过在细胞中过表达或干扰某个基因研究基因对细胞增殖能力的影响,进一步研究基因的功能,或对细胞进行药物处理,研究药物对增殖的影响。细胞增殖是生...

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细胞增值

细胞增殖与细胞凋亡、细胞周期等是肿瘤研究的重要表型,是分子生物学和药理学研究解决的问题之一。通过在细胞中过表达或干扰某个基因研究基因对细胞增殖能力的影响,进一步研究基因的功能,或对细胞进行药物处理,研究药物对增殖的影响。

细胞增殖是生物体的重要生命特征,细胞以分裂的方式进行增殖,是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础。细胞增殖的研究方法有很多,主要包括:CCK8/ CellTiter-Glo™等方法。

CCK8实验

Cell Counting Kit-8(简称CCK-8)试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。

目的:考察目的基因对细胞的增殖能力产生的影响或药物对细胞增殖能力的影响。  

材料:目的细胞、稳转株(空载、目的基因)  

步骤:细胞收集——细胞铺板——(药物处理)——细胞培养0、6、24、48、72小时后加入CCK-8处理,酶标仪检测 。

优势

  1. 操作简单,避免细胞计数过程中人为因素的影响;

  2. 细胞用量少,检测灵敏度高,稳定;

  3. 可反复用酶标仪读板,检测时间灵活,不影响细胞进行后续实验;

  4. CCK-8产生的Formazan是水溶性的,无需换液,尤其适用于悬浮细胞,与MTT法相比更方便,更安全。 

CTG实验

目的:考察目的基因对细胞的增殖能力产生的影响或药物对细胞增殖能力的影响  

材料:目的细胞  

步骤:细胞收集——细胞铺板——(药物处理)——细胞培养0、24、48、72、96小时后加入CellTiter-Glo™溶液用微孔板震荡器5分钟,于室温放置10分钟-酶标仪检测荧光值

优势

  1. 同普通的MTT、CCK8法相比,CellTiter-Glo™发光活细胞检测系统的检测试剂具有最高灵敏度和较长的信号持续时间,此系统已经广泛地应用在生命科学研究领域中,如一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等;

  2. CellTiter-Glo™试剂和细胞培养中的常用培养基兼容,如RPMI1640、MEM、DMEM和 Ham's F12,也不受酚红和有机溶剂的影响,误差小,准确率高。  

细胞凋亡

细胞凋亡是肿瘤和发育研究的重点,同时也是药理学研究的热点。细胞凋亡是指细胞在一定的生理或病理条件下,遵循自身的程序,自主结束其生命的过程。它是一个主动的,高度有序的,基因控制的,一系列酶参与的过程。细胞凋亡的过程大致可分为以下几个阶段:接受凋亡信号→凋亡调控分子间的相互作用→蛋白水解酶的活化(Caspase)→进入连续反应过程。  

目的:通过慢病毒感染获得过表达某基因的细胞株,利用Annexin-PE和7-AAD双染法对正常细胞、对照组细胞、基因过表达组细胞的凋亡情况进行检测,研究基因对细胞凋亡的影响。  

材料:质粒与细胞株  

步骤:细胞准备——收集细胞——Annexin-PE和 7-AAD进行双染色——流式上机检测。 

细胞侵袭和迁移

在肿瘤发展过程中,细胞进入循环系统的能力是重要的研究对象。相关的信号通路主要可以分为控制细胞黏附和控制细胞骨架。细胞的迁移与侵袭主要与细胞骨架和黏附相关。肿瘤细胞侵袭和迁移能力的改变通常采用Transwell进行检测。细胞划痕也是测定肿瘤细胞运动特性的方法,由于无法区别正常增殖和迁移细胞,应用有局限性。




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