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贴壁细胞siRNA转染步骤

贴壁细胞siRNA转染步骤

示例:使用Lipofectamine RNAiMAX和HeLa cell 用于siRNA的在6孔板上进行的转染实验。注:请实验前确认实验使用的细胞系是否适合转染试剂。1、转染前一天,在6孔板中每个孔内播种 3.0 x 10^5 HeLa c...

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示例:使用Lipofectamine RNAiMAX和HeLa cell 用于siRNA的在6孔板上进行的转染实验。

注:请实验前确认实验使用的细胞系是否适合转染试剂。

1、转染前一天,在6孔板中每个孔内播种 3.0 x 10^5 HeLa cells,每孔放2.5mL不含抗生素的生长培养基。这样在转染时会有50-60%的融合率。
2、 从细胞中去除生长培养基。
3、 加入1.5 mL新鲜的不含血清的生长培养基。
4、对于每个转染的孔,按照如下方法准备siRNA 和 Lipofectamine RNAiMAX 混合物。
4-1、在250μl的无血清生长培养基中加入100pmole siRNA,柔和混匀。

4-2、Lipofectamine RNAiMAX使用前要先混匀,然后在250μl生长培养基中加入5μl的Lipofectamine RNAiMAX进行稀释,室温下温育5分钟。
4-3、混合稀释好的siRNA和Lipofectamine RNAiMAX,室温下温育20分钟。
5、 加入混合物到含有HeLa cells的6孔板中,每孔终体积为2ML,并轻晃混匀。
6、 在37℃的二氧化碳培养箱中培养细胞 5-6小时。
7、 更换含有血清的培养基并培养细胞 24-48小时,直到进行基因敲除实验。



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