如何进行动物基因过表达、蛋白功能检测实验？

动物体内DNA转染试剂Entranster-in vivo DNA，轻松进行DNA体内转染，实现基因过表达，蛋白功能测定等的实验，3天可得出结果，下面以12.5μg的核酸与25μl转染试剂，总注射体积100μl，20g小鼠尾静脉注射为例说明。局部注射不用稀释，直接根据需要把核酸和转染试剂混合即可使用。

1. 核酸的稀释。将12.5μg核酸用适量无内毒素纯水稀释成1μg/μl(如核酸原液浓度小，注射体积会增大)，加入12.5ul的水，再加入10%葡萄糖溶液(w/v)25μl，终体积50μl，充分混匀。

2. 转染试剂的稀释。取25μl的Entranster^TM-in vivo试剂用25μl 的10%葡萄糖溶液稀释，终体积为50μl，充分混匀。

3. 转染复合物形成。立即将稀释后的转染试剂加入到稀释后的核酸溶液中，充分混匀。

4. 室温静置15分钟。配制好的转染复合物请即配即用，不宜长期存放。

5. 动物注射。

说明：（1）尾静脉注射时请掌握注射技巧，一般选用远端1/3处静脉注射，如感觉到较强阻力，请停止注射，重新寻找静脉进行操作，不要强力推注，否则容易将药液注射在尾部，导致尾部溃烂。注射完成后移去针头，按压针孔10秒以上，防止药液流出。

           （2）. 0.625mg/kg的给药剂量是起始给药剂量，如果动物可以耐受，可以按比例增加剂量；如果动物不能耐受，可以适当同比例减少剂量。3).局部注射，尽可能多注射药液，有利于提高转染效果。

6. 基因表达检测。一般来说，根据注射方法和靶器官的差异，12-48小时后基因表达效果较好。

7. 长期给药。一次给药检测的最佳时间是注射后12-48小时。如果需要维持长期效果，可以采用多次注射的方法，注射频度一般为每间隔2-3天一次，也可以根据具体的实验情况。       

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