病理实验技术 一

1、 什么是病理学实验技术？

病理学技术（组织标本切片和染色技术）是组织学、病理学等学科用于观察和研究组织与细胞的正常形态及病理变化的常用方法。

2、 什么是组织制片技术及其目的？

组织经过固定、切片和染色后，光波通过被检组织成分时，波长和振幅发生改变，在显微镜下能清晰的观察其组织结构，称之为光镜标本的基本制作方法或称为组织制片技术。

目的生物学标本在生活状态下多为无色透明，而且组织一旦离开机体后很快就会死亡，其结构就会失去正常状态。必须对组织采取固定、切片和染色措施！

3、 组织非切片制片方法有哪些？

1组织分离标本 2.组织活体标本 3.组织涂片标本4.磨片标本5.整体封存（压片）标本6.组织铺片标本7.组织印片标本等

4、 根据所使用支持物质的不同，组织切片方法分为哪些种类？组织切片的主要程序。

根据所使用支持物质的不同，切片方法分为：1.石蜡切片法2.火棉胶切片法3.冰冻切片法4.超薄切片法（电镜技术）5.树脂切片6.碳蜡切片

组织切片的主要程序：

取材、固定→脱水→透明、浸透→包埋、切片→贴片、染色→浸洗→脱水→透明→封固。

5、 标本主要来源及取材的要求、取材主要注意事项？

来源：临床活体检查，手术切除，病理解剖，实验动物等

要求：

1、根据实验目的和要求及病变程度合理取得组织材料。

2、取材的过程迅速、准确

组织取材注意事项1.材料保持新鲜2.标本大小适宜3.勿使组织块受挤压4.尽量保持组织的原有形态5.选好标本切面6.保持材料的清洁7.切除不需要部分8.明确编号，登记

6、 何谓固定，固定的目的及主要方法有哪些？影响固定的因素及注意事项。常用固定液有哪些。

标本（组织）固定是指从人体内或动物体内取下的材料立即浸泡在化学试剂中，借助化学试剂的作用，将组织 细胞结构保存起来，使其形态结构近似生活状态的一种手段。

固定的目的：

1）防止标本的自溶与腐败，以保持组织细胞的固有形态。

2）使组织细胞内的蛋白质、脂肪、糖和酶等各种物质成份沉淀或凝固成不溶性物质，以保持它原有的结构与生活时相仿。

3）可增强染色的作用。使组织中的各种物质沉淀凝固而产生不同的折射率，造成光学上的差异，以便病理染色后易于鉴别和观察。

4）固定剂兼有硬化作用，使组织硬化，增加组织硬度，便于制片。

5）防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有形态结构。另外，对某些具有传染性的标本，能防止疾病的扩散。

固定的方法：

物理方法 干燥：血涂片 高热：细菌涂片 低温骤冷 化学方法 使用化学试剂配制成固定液固定

影响固定的因素：1 .组织固定必须新鲜：无论取人体或动物组织，都必须立即投入固定剂。2.防止组织因固定剂的作用而发生变形：3.标本大小：在保证形态结构完整性的同时，厚度不超过5mm。4.固定液的量：一般为组织块体积的20-30倍（不得少于标本体积的5倍）。5.固定时间：根据组织的种类、大小，固定剂种类、性质、渗透力的强弱而定。6.固定温度：室温（20-25℃）或低温（如4℃），一般不应超过40-45 ℃。7.选择适当的固定液：8.促使固定

注意事项：免疫组化固定方法的原则是：在保持细胞形态完好和所测抗原的前提下，应选用浓度最低的固定液和最短的固定时间。为此，固定组织时应该：

1）组织新鲜，尽早、尽快固定。2）组织块尽量小。3）固定后充分水洗，减少固定液造成的人工假象。 4）针对抗原、染色法选择最佳的固定方法 。

常用的固定剂：

1）10%福尔马林缓冲液（pH7.4）2）4%多聚甲醛磷酸缓冲液（pH7.4） 3）Bouin液 4）Zamboni’s液 5）丙酮 6）95%乙醇 7）A-F液 7．何谓脱水，脱水的目的、常用脱水剂及脱水注意事项。

定义：利用某种化学试剂逐步将标本内部吸收的水分置换出来，以使标本处于无水状态，这一过程叫脱水。 目的和原则1有利于标本的下一步处理，即透明、浸透、包埋 2有利于切片的操作 3有利于标本的长久保存

常用的脱水剂：1.单纯脱水剂：如乙醇、丙酮和甲醇 2.脱水兼透明剂：如正丁醇、叔丁醇等

注意事项：脱水时必须由低浓度脱水剂开始，逐步转入高浓度脱水剂，经过各级浓度的脱水剂使其所含的水分逐渐减少而代之以脱水剂。防止组织过度收缩变形，或脱水不完全而影响制片效果。

8．石蜡包埋程序

1）组织取材3mm厚度，固定于福尔马林数小时后再换以新鲜福尔马林固定数小时。

2）组织流水冲洗6-12h。

3）70％酒精2-4h。

4）80％酒精2-4h。

5）90％酒精2-4h。

6）95％酒精（Ⅰ、Ⅱ）2-4h。

7）100％酒精（Ⅰ、Ⅱ ）1-2h。

8）二甲苯（Ⅰ）5-30min。

9）(二甲苯（Ⅱ） 5-30min)。

10）浸蜡（Ⅰ、Ⅱ ）2h。

11）组织包埋